单细胞测序的第一步——组织解离，堪称实验成败的“生死线”！不同组织的细胞特性天差地别，肝实质细胞易破碎、脑组织神经元“大到卡芯片”、禽类脾脏红细胞“扎堆捣乱”。贝纳基因实验团队实测6大组织，整理出这份解离经验，附实测数据+避坑要点。

六大组织解离实测

人-肝癌

细胞活率：92.92%

有核率：81%

细胞浓度：3.81×10⁶个/ml

1、解离组织免疫细胞占比较高，需提前确认研究目标细胞类型。

避坑要点：

1、肝实质细胞在解离中易破碎，若需研究该类细胞，建议提核或富集（直接解离会释放酶类，加剧细胞破损）；

2、解离组织免疫细胞占比较高，需提前确认研究目标细胞类型。

人-滑膜 

细胞活率：94.22%

有核率：80%

细胞浓度：1.59×10⁶个/ml

避坑要点：

1、滑膜组处理时需要去除黄色脂肪、坏死区域及血管等非目标组织，避免影响酶解效率；

2、样本极易结团，需多次轻柔吹打，减少组织粘连。

小鼠-肺

细胞活率：95.29%

有核率：94%

细胞浓度：1.24×10⁶个/ml

避坑要点：

年轻小鼠仅需1/4肺组织即可，老年或疾病模型鼠总细胞数偏少，需增加样本量。

小鼠-肾 

细胞活率：92.67%

有核率：70%

细胞浓度：1.51×10⁶个/ml

避坑要点：

1、肾脏组织较脏，制备悬液后存在背景嘈杂，结团率高等难点；

2、如果关注肾小球足细胞、肾小球系膜细胞等细胞类型，建议提核或其他解离富集方案。

小鼠脑（解离vs抽核，选对方法很重要！）

小鼠-脑（解离） 

细胞活率：89.86%

有核率：69%

细胞浓度：1.21×10⁶个/ml

避坑要点：

1、脑组织解离能同时获得细胞质和细胞核内的转录表达信息，适用于新鲜组织样本；

2、由于神经元细胞直径过大，不能通过微流控芯片，因此通常解离进行单细胞测序神经元细胞比例会比较低。

小鼠脑-抽核

核膜完整

有核率：70%

细胞浓度：2.99×10⁶个/ml

避坑要点：

1、脑组织抽核可以适用于无法及时进行解离而冻存的组织样本，可以捕获较高比例的神经元细胞；

2、缺点是只能检测细胞核中的mRNA，丢失了细胞质中的RNA信息，每个细胞核中检测到的基因可能会有偏少的风险，可能不利于细胞亚型的鉴定。

禽类-脾脏

细胞活率：96.55%

有核率：74%

红细胞比例：~5%（处理后）

细胞浓度：7.13E×10⁶个/ml

避坑要点：

1、禽类脾脏红细胞很丰富，初次解离完有核红细胞占比大概50％；

2、由于禽类、鱼类等非哺乳动物红细胞有细胞核，常规裂红手段无法去除红细胞；

3、建议准备样品时清洗干净残留血液，实验室采取密度梯度离心的方式去除红细胞，可以有效降低红细胞的占比。

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